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          • 質粒轉染
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          • 質粒轉染

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            • ¥2500.00
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          1技術原理:

          轉染類型:根據不同的實驗目的,外源DNA導入哺乳動物細胞又可分為瞬時轉染和穩定轉染。

          瞬時轉染一般是指外源基因進入受體細胞后,存在于游離的載體上,不整合到染色體,在外源DNA導入細胞1—4天后收獲轉染細胞對轉染基因的轉錄和復制進行分析。

          而穩定轉染則需要使外源基因整合于細胞染色體從而得到穩定的轉染細胞株。實現細胞的穩定轉染,通常需要一個抗生素篩選的過程。

          除DEAE葡聚糖只能用于瞬時轉染,其他方法均可用于瞬時轉染和穩定轉染。

          質粒轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。

          因為不同的細胞在生理代謝及分裂上均存在差異,因此研究者將外源遺傳物質導入細胞的過程中需要選擇不同的方式。目前,將外源物質導入細胞的方法主要分為三大類:1、脂質體(或是脂質體替代物)轉染;2、電轉;3、病毒感染。這三種方法互有優劣。脂質體或是脂質體替代物轉染操作簡便,價格低廉,但是對細胞毒性大。而且,有些細胞通過脂質體轉染效率很低;電轉操作方便快捷,但是需要專門的儀器,對細胞損傷也比較大;病毒感染克服了前兩者的劣勢,感染效率高,對細胞毒性小,但是病毒前期包裝需要大量的時間和精力 。

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          質粒轉染

          元/指標

          2500.00

          備注:不含細胞株、轉染試劑。

          2)質粒轉染的詳細介紹

          脂質體:中性脂質(lipid)是利用脂質膜包裹DNA,借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電陽離子脂質體(Cationic liposomes)則不同,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物,據認為一個約5kb的質粒會結合2-4個陽離子脂質體,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經過內吞被導入培養的細胞。脂質體轉染方法始于1987年,這個方法的出現使得轉染效率、轉染的穩定性和可重復性大大提高,并廣為使用。陽離子脂質體細胞毒性相對較高,對不同的細胞可能會干擾細胞的代謝。血清的存在有可能會影響轉染效率,需要進行優化。通常轉染試劑有不同脂質(lipid)和脂質體(liposome)混合配方。

          非脂質體的脂質(Non-liposomal lipids):這個讀著頗為拗口的新一代技術,代表著脂質體技術的未來發展方向——革新配方成分形成膠束(micellar)結構而非簡單的雙層膜結構,令核酸傳遞更有效率而且細胞毒性也顯著降低

          活化的樹狀聚合物(Activated dendrimers):這個確乎是Qiagen的獨門配方的Activated dendrimers本來真正屬于納米技術,高度樹狀分枝形成球形結構有著均一的大小和形狀,借助每個球體無數活化的氨基末端凝聚在DNA上形成較為致密的結構,并吸附在細胞膜上,經過內吞進入細胞?;罨陌被梢哉{節胞內融酶體的pH值,抑制降解活性,使得DNA穩定存在。轉染的效率高,毒性低,可重復性好。血清的存在能顯著提高轉染效率。

          多胺和新一代轉染介質:多胺其實也是氨基多聚物,原理無非基于吸附帶負電的核酸形成非共價結合的復合物,結合并穿越同樣帶負電的細胞膜。優點是可以攜帶較大的分子,而且細胞毒性也較低,不會干擾細胞代謝途徑。新一代轉染介質并不局限于單一成分,各種不同專利配方的脂質、加上蛋白質組分、以及各種各樣的專利成分,務求令轉染效率更高,操作更方便,細胞毒性更低。還有的產品將脂質偶聯到細胞膜特定受體蛋白的配基上,讓受體蛋白更有效率地轉運DNA或者生物大分子復合物進入細胞……

          顯微注射和基因槍(Biolistic particle delivery):顯微注射和基因槍是更特殊的導入DNA的方式:將DNA沉淀包被在極為微小的金顆粒(閃閃發光的金珠,gold beads)上,借助高壓基因槍將大分子直接“射”入細胞,一旦細胞接受,就會發生瞬時表達——這種方法多用于活體內導入DNA,比如皮膚的DNA免疫。也有用于上皮細胞原代細胞的報告。最新技術是利用硅納米顆粒作為基因轉染載體。
          顯微注射顧名思義就是使用一根超細針頭將DNA,RNA或蛋白直接注入細胞質或細胞核;整合的機會高一些,但適用這種方法的細胞好像不多,體外受精較為常見。這兩種方法需要的昂貴設備和相對復雜的技術,令普通實驗室敬而遠之。

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