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          服務介紹:

            蛋白質免疫印跡法 (Western Blot ) ,簡稱WB ,是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質分離開,然后將目標蛋白轉移到載體(PVDF)膜上,利用抗原抗體的特異性結合,用特異性的一抗結合目標蛋白,用HRP標記的二抗結合一抗,再加以ECL發光液顯色,檢測組織或者細胞內某種或者某些特異性蛋白質的表達。蛋白質免疫印跡是做蛋白質分析的一種常規技術,常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析,還可以用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續分析。

          服務項目 規格 價格

          普通組織總蛋白提取

          元/例

          ¥20.00

          骨/脂肪總蛋白提取

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          核/膜/質/漿蛋白提取

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          現有庫存進口抗體

          元/例

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          抗體最適濃度摸索

          元/種

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          WesternBlot 低于8例

          元/板

          ¥800.00

          WesternBlot 高于8例

          元/例

          ¥100.00


          里來生物技術優勢:
          (1)高效蛋白提取液進行高質量蛋白的提取,同時高效的蛋白酶抑制劑有效防止蛋白的降解及去磷酸化等作用;
          (2)里來生物擁有多年的Western Blot檢測經驗,為客戶提供專業的技術服務;
          (3)里來生物為客戶設置預實驗,根據客戶樣品具體情況摸索最適上樣量和抗體最適稀釋度。








          實驗樣品要求:
          (1)細胞不少于5×106個;
          (2)組織樣品不少于50mg;
          (3)總蛋白濃度不低于 2μg/μl(至少50μl);

          注意事項:
          (1)每張膜上做一種目的蛋白和相應的內參蛋白。每張膜上可以做8個樣品。一般狀況下,2周即可完成實驗。如遇特殊情況,如一抗不好,蛋白濃度低或蛋白特殊,如分子量大等,周期會有所延長。

          (2)Western Blot細胞蛋白樣本的準備及運輸:去掉培養液,用PBS洗一次后,加入少量PBS,用細胞刮將細胞刮下,用1ml槍吸取細胞易于1.5ml EP管中,快速離心(升至最高轉速就可stop)去除上清后,可按下面兩種方法運輸:A.細胞干運輸:將細胞干放入液氮速凍,-80℃保存; 如需長途過夜運輸,建議干冰運輸;如當天送達樣本,可用液氮或者-80冰袋運輸;B.細胞裂解液運輸:加入一定量的胞裂解液后即可冷藏運輸(冰袋或者冰盒)。如需檢測磷酸化蛋白,建議裂解液中加入終濃度1mM的NaF,NaF可抑制磷酸酶活性,保護蛋白磷酸化水平。如果加入裂解液后提取蛋白,則置于冰上裂解1 h,12000rpm離心10 min后取上清,即為蛋白樣本。蛋白樣本可-20度冷藏運輸(建議快遞寄送用干冰或者足量-80度冰袋),保存需要-80℃。

          (3)蛋白樣本運輸:蛋白樣本需要經過濃度測定,再進行變性,變性時先加入Sample buffer,再95℃ 10 min,Sample buffer可防止變性導致的蛋白沉淀析出。變性的蛋白可直接冷藏運輸,-20℃穩定保存。

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